Diagnostični test ANA (antinuklearnih protiteles)

Test antinuklearnih protiteles (ANA) se uporablja kot primarni test za oceno bolnikovega stanja pri avtoimunskih motnjah vezivnega tkiva. Gre za motnje, ki prizadenejo številna tkiva in organe po telesu. Kaj kažejo rezultati testa? Kaj so ANA? Katere bolezni je mogoče odkriti ANA?

Kazalo:

1. ANA test - kaj so antinuklearna protitelesa?
2. ANA test - uporaba v diagnostiki
3. ANA test - prisotnost ANA v krvi zdravih ljudi
4. ANA test - kako je to ime?
5. ANA test - kdaj je treba opraviti ANA test?

Okrajšava ANA izhaja iz angleškega imena anti-nuklearna protitelesa, kar v poljščini pomeni "antinuklearna protitelesa". Te molekule pripadajo beljakovinam, imenovanim avtoprotitelesa, ki so beljakovine, ki napadajo telo, ki jih proizvaja.

ANA test - kaj so antinuklearna protitelesa?

Človeško telo ima veliko obrambnih mehanizmov pred patogeni. Ena izmed njih je humoralna imuniteta. Temelji na proizvodnji zaščitnih protiteles. Pri zdravih ljudeh imunski sistem proizvaja protitelesa proti tujim antigenom.

Včasih pa obstajajo situacije, ko nastajajo avtoantigeni, ki so usmerjeni proti beljakovinam v našem telesu. Ta postopek je bistven za nastanek avtoimunskih bolezni.

Antinuklearna protitelesa napadajo beljakovine in druge molekule, ki tvorijo jedro.

Obstaja veliko različnih vrst ANA. Razgradnja teh protiteles temelji na vrstah jedrskih komponent, proti katerim so te molekule usmerjene. Glede na vrsto se lahko ANA vežejo na posamezne beljakovine in kompleksne komplekse.

Na primer, obstajajo protitelesa proti jedrskim kanalom in histonom, torej molekule, na katere je navita DNK.

Napadljive ANA lahko ločimo:

• GOUT
• histoni
• ribonukleoproteini
• Jedrska RNA
• nehistonske beljakovine

Vse naštete komponente so značilne za celično jedro.

ANA so prisotne v krvi med vsemi vrstami bolezni. Sem spadajo avtoimunske motnje, rak in nekatere vrste okužb. To omogoča uporabo antinuklearnih protiteles pri diagnozi nekaterih bolezni.

ANA test - uporaba v diagnostiki

Test ANA se uporablja za odkrivanje antinuklearnih avtoprotiteles v bolnikovi krvi. Ta pregled je pomemben za diagnozo bolezni, kot so:

• sistemski eritematozni lupus
• Sjögrenov sindrom
• sklerodermija
• polimiozitis
• dermatomiozitis
• avtoimunski hepatitis
• valjanje, ki ga povzročajo reakcije na zdravila

Pozitiven rezultat testa ANA je diagnostičen le, če klinični simptomi to potrjujejo. Testiranje antinuklearnih protiteles je lahko koristno tudi za spremljanje napredovanja bolezni.

Tipični testi, ki se uporabljajo za odkrivanje in vrednotenje ANA, so:

• posredna imunofluorescenca
• ELISA-encimski imunski test

Metoda posredne imunofluorescence

Posredna imunofluorescenca je eden najpogosteje uporabljenih testov ANA. Običajno ta test uporablja celice Hep-2. Uporabljajo se v obliki tanke plasti na mikroskopskih stekelcih. Nato se serum, zbran od bolnika, položi nanje in inkubira skupaj s celicami Hep-2.

Če so v odvzetem vzorcu prisotne ANA, jih po inkubacijskem obdobju odkrijejo v obliki, povezani z antigeni v celičnem jedru. To lahko vidimo z dodajanjem fluorescentne nalepke, ki se veže na protitelesa.

V ta namen se najpogosteje uporabljajo fluorescein ali izotopcianat rodopsina B (FITC) ali rodopsin B. Molekula fluorescira, ko ji je izpostavljen snop svetlobe z določeno valovno dolžino. Za opazovanje in vrednotenje fluorescence se uporablja mikroskop.

V HEp-2 celicah lahko opazimo različne vzorce fluorescence, odvisno od vrste protiteles v človeškem serumu in lokalizacije antigena. Njihova analiza omogoča določitev vrst protiteles v vzorcu.

Raven protiteles se določi s serijskim redčenjem krvnega seruma. Test ANA se šteje za pozitivnega, če opazimo fluorescenco pri titru 1: 40/1: 80. Rezultat nad 1: 160 pa je pomembnega diagnostičnega pomena.

Encimski imunski test (ELISA)

Encimski imunski test (ELISA) uporablja mikrotitrske plošče z antigeni za odkrivanje ANA. Vsaka jamica plošče je prevlečena z enim ali več antigeni. Ta služi za odkrivanje specifičnih protiteles.

Krvni serum inkubiramo v vdolbinicah plošče in nato izperemo. Če so bila v vzorcu prisotna antinuklearna protitelesa, bodo po pranju ostala vezana na ustrezne antigene na mikrotitrski plošči.

V naslednjem koraku testa se v jamico plošče doda drugo protitelo, vezano na encime. Encimska reakcija povzroči, da raztopina spremeni barvo.

Barvna razlika je sorazmerna s količino protiteles, vezanih na antigen, v vdolbinici plošče. Barvo dobljene raztopine lahko ocenimo s spektrofotometrično metodo, torej z merjenjem jakosti svetlobnega žarka, ki se prenaša skozi raztopino.

ANA test - prisotnost ANA v krvi zdravih ljudi

Ocenjuje se, da so v krvi 5% človeške populacije v krvi prisotna antinuklearna protitelesa v koncentraciji, ki se šteje za diagnostično pomembno, ne glede na prisotnost bolezni.

Ker se pogostost ANA s starostjo povečuje, je kar 10-37% zdravih ljudi, starejših od 65 let, pozitivnih na prisotnost ANA. Takšni primeri so pogostejši pri ženskah kot pri moških.

ANA test - kako je to ime?

Značilna vrednost za test ANA je titer. Označuje stopnjo razredčitve seruma, pri kateri antinuklearna protitelesa ni mogoče zaznati. Višja kot je koncentracija ANA v krvi, večji je titer v rezultatih testa.

Preskus specifičnosti antinuklearnih protiteles je priporočljiv, če je titer nad 1: 160. Te dodatne teste je treba opraviti skupaj z bolnikovo analizo klinične anamneze in fizičnim pregledom. Namen teh korakov je diagnosticiranje ali izključitev avtoimunskih motenj.

Upoštevati pa je treba, da se tak rezultat pojavi pri 5% bolnikov, ne glede na stanje bolezni. Rezultat testa je diagnostičen le, če obstajajo drugi simptomi bolezni.

Negativni rezultat testa ANA kaže, da je malo verjetno, da ima bolnik lupus ali drugo avtoimunsko bolezen.

ANA test - kdaj je treba opraviti ANA test?

Test ANA se odredi, kadar bolnikovi simptomi kažejo na sistemsko avtoimunsko motnjo. Lahko so zelo neočitni in nespecifični ter se sčasoma lahko spremenijo.

Primeri simptomov vključujejo:

• Nizka vročina
• Vztrajna utrujenost
• Artritisu podobna bolečina
• Rdeč izpuščaj
• Občutljivost kože na svetlobo
• Izguba las
• Bolečine v mišicah
• Otrplost ali mravljinčenje v rokah ali nogah
• Vnetje organov in tkiv (ledvice, pljuča, srce, sluznice, osrednji živčni sistem in ožilje)

Literatura:

1. https://labtestsonline.org/tests/antinuclear-antibody-ana
2. "Predmeti medicinskih predmetov". Nacionalna medicinska knjižnica. 12. februarja 2013.
3. "Test antinuklearnih protiteles: kaj to pomeni". Ameriška fundacija Lupus. Pridobljeno 7. junija 2013
4. Kumar, Y; Bhatia, A; Minz, RW (2. januar 2009). "Antinuklearna protitelesa in njihove metode odkrivanja pri diagnostiki bolezni vezivnega tkiva: potovanje ponovno obiskano". Diagnostična patologija
5. www.autopróbciala.info
6. Kavanaugh, Arthur, Tomar, Russell, Reveille, John, Salomon, Daniel H. in drugi. Smernice za klinično uporabo testa antinuklearnih protiteles in testi za posebna avtoprotitelesa proti jedrskim antigenom. Arhiv za patologijo in laboratorijsko medicino. 124 (1), str. 71-81, januar 2000

O avtorju

Sara Janowska, doktorska študentka interdisciplinarnega doktorskega študija s področja farmacevtskih in biomedicinskih znanosti na Medicinski univerzi v Lublinu in Inštitutu za biotehnologijo v Białystoku, diplomirana farmacevtka na Medicinski univerzi v Lublinu s specializacijo iz rastlinske medicine. Magistrirala je v zagovoru na področju farmacevtske botanike o antioksidativnih lastnostih izvlečkov iz dvajsetih vrst mahov. Trenutno se v svojem znanstvenem delu ukvarja s sintezo novih snovi proti raku in proučevanjem njihovih lastnosti na celičnih linijah raka. Dve leti je delala kot magistra farmacije v odprti lekarni.

Preberite več od tega avtorja