Pretočna citometrija je diagnostična in raziskovalna tehnika, ki je že vrsto let znana in se pogosto uporablja v onkologiji. Pretočna citometrija omogoča pregled celic, ki tvorijo suspenzijo v laminarnem ali razslojenem tekočem toku, z napravo, imenovano pretočni citometer. Kakšne so indikacije za pretočno citometrijo in kako se to izvaja?
Pretočna citometrija se uporablja pri diagnozi hematoloških novotvorb, ker gre za tekoče tumorje, vendar je le pomožna metoda. Vendar se je treba spomniti, da obstaja en rak, ki ga je mogoče diagnosticirati samo s to metodo. To je kronična limfocitna levkemija.
V primeru drugih neoplastičnih bolezni se kot metoda za lažjo diagnozo uporablja pretočna citometrija, ki kaže zelo pomembne značilnosti neoplastičnih celic. Ta metoda se uporablja tudi za oceno učinkovitosti uporabljenega zdravljenja.
Pretočna citometrija - kaj kaže?
Tok tekočine, ki vsebuje preskusne delce, se s konstantno hitrostjo (100-2000 delcev na sekundo) prenaša skozi merilno območje citometra. Tu optične metode analizirajo oblike, mere, notranjo zgradbo celic in njihovo vsebino, npr. DNA. Vse celice so optično označene.
Meritve temeljijo na lastnostih razprševanja laserske svetlobe v posameznih celicah ali njihovih sestavnih delih (jedra, kromosomi, mitohondriji) ali na fluorescenci, ki jo povzročajo.
Optični signali se pretvorijo v električne signale, ki so po analizi grafično predstavljeni kot mono- ali biparametrične porazdelitve.
Citometer omogoča tudi ločevanje delcev po izstopu iz merilnega območja. Lahko rečemo, da naprava razporedi (loči) celice z enakimi sestavnimi elementi (pripravljalno razvrščanje) ali izolira določene vrste celic (analitično razvrščanje).
Pretočna citometrija omogoča preučevanje populacijskih značilnosti celic, analizo celičnih komponent (zlasti kot so nukleinske kisline, beljakovine, površinski in celični antigeni), encimsko aktivnost, membranski potencial, aktivnost mitohondrijev, znotrajcelični pH, transport ionov in fluidnost membrane.
Pretočna citometrija - uporaba
Pretočna citometrija, ki se uporablja pri diagnostiki, omogoča določanje fenotipa novotvornih celic in izražanja posameznih proteinov. Da bi to dosegli, se uporabljajo označena fluorescenčna protitelesa, ki se na značilen način vežejo na antigene na površini celične membrane. Zahvaljujoč temu je mogoče določiti stopnjo njihove diferenciacije, izvor, prognostične in terapevtske označevalce, ki olajšajo odločitev o nadaljnjih diagnostičnih in terapevtskih postopkih.
Druga aplikacija za pretočno citometrijo je spremljanje učinkovitosti uporabljenega zdravljenja z oceno t.i. "preostala bolezen", kar je odstotek celic s tumorjem podobnih fenotipov, ki ostanejo po zdravljenju.
Pretočna citometrija olajša tudi raziskave raka. Zahvaljujoč tej metodi je mogoče iskati npr. Receptorje, ki se nahajajo na površini neoplastičnih celic in so lahko tarče zdravljenja.
Metoda omogoča oceno aktivnosti beljakovin znotraj celice. Možno je tudi oceniti celični cikel, na primer z določitvijo količine DNA v celici.
V procesu razmnoževanja celica prehaja skozi celični cikel skozi faze, v katerih podvoji količino DNA. Z oceno te količine lahko ugotovimo, v kateri fazi so celice, ali se razmnožujejo ali ne ali gre v apoptozo. Z drugimi besedami, s pomočjo pretočne citometrije lahko ugotovite, ali se celice pripravljajo na apoptozo, programiran proces smrti.
Pretočna citometrija - prihodnost
Pretočna citometrija je v medicini znana in se uporablja že nekaj desetletij. Vendar se nenehno izboljšuje in ustvarja nove diagnostične in raziskovalne možnosti. V prvem obdobju uporabe te metode je bilo mogoče določiti le velikost in stopnjo razdrobljenosti celic.
Uporaba laserske svetlobe v napravah s pretočno citometrijo omogoča vzbujanje določenih fluorescentnih markerjev in nato ovrednotenje njihove emisije. Sodobni citometri omogočajo znatno povečanje števila markerjev, ki se ocenijo naenkrat, kar vsekakor pomeni povečanje občutljivosti te metode.
Zato se uporablja ne samo pri diagnozi novotvorbenih bolezni, temveč tudi za oceno učinkovitosti zdravljenja.
O avtorju
Preberite več člankov tega avtorja
